- 郭一鸣;霍海龙;林万;和塍;李清宏;赵志军;赵桂英;霍金龙;
为了研究高黎贡山猪溶菌酶样蛋白4(Lysozyme-like 4,LYZL4)在精子发生中的潜在功能，系统分析其分子特征、转录调控机制与组织表达定位，基于高黎贡山猪睾丸转录组测序数据，构建LYZL4的ceRNA调控网络分析图；通过分析LYZL4在多物种中的序列同源性及其功能特性，构建多物种蛋白质进化树和互作网络。结果表明，LYZL4基因位于猪的13号染色体，含5个外显子，编码145个氨基酸。进化分析结果表明，LYZL4在哺乳动物中高度保守，与牛和山羊亲缘关系比较近。ceRNA网络分析结果发现，ssc-let-7i-5p靶向调控LYZL4，并与lncRNA(ENSSSCG00000046787.1、ENSSSCG00000043661.1)竞争性结合ssc-let-7i-5p，基因功能涉及受精、精卵识别和膜融合等过程。互作蛋白网络提示，LYZL4与MIP、PDZK1等蛋白存在相互作用，这些蛋白主要富集在催乳素信号通路、IL-17信号通路、谷氨酸能突触及半乳糖代谢等通路上。功能试验验证方面，组织表达谱结果显示，LYZL4基因在睾丸中表达量随性成熟显著上调。免疫荧光（IF）和免疫组化（IHC）定位结果显示，LYZL4蛋白在睾丸组织的细胞分布主要定位于精子。
2025年06期 v.53;No.466 47-56页 [查看摘要][在线阅读][下载 2680K] [下载次数：4 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 靳琳宇;史明月;姚蕾;徐浩楠;杨恬;李步高;曹果清;路畅;
CXXC5是一种含有CXXC型锌指结构域的蛋白质，参与多种生物学过程，在基因表达调控中发挥重要作用。为研究CXXC5基因的生物学特性及其在晋汾白猪骨骼肌不同发育阶段和不同组织中的表达差异，通过多种生物信息学软件对CXXC5基因进行分析，包括蛋白质理化性质、亚细胞定位、信号肽预测、二级和三级结构特征等。基于1、90 d和180 d晋汾白猪的背最长肌组织转录组测序数据，构建了CXXC5基因的表达谱，并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)评估了90 d晋汾白猪心、肝、脾、肺、肾、背肌、背脂组织中CXXC5基因的表达水平。生物信息学分析结果显示，猪CXXC5蛋白分子质量为32 968.81 u，等电点为9.35，主要定位于细胞核，是一种亲水性非分泌蛋白且不稳定，无规则卷曲、α-螺旋和延伸链是构成该蛋白二级结构和三级结构的主要方式。qRT-PCR结果显示，CXXC5基因在背最长肌中90 d表达量最高，180 d表达量最低；在肝脏中的表达量显著高于其他组织，其次是背肌，在肺脏中相对表达量较低。综上，CXXC5在骨骼肌不同发育阶段中的表达具有显著差异，其是骨骼肌生长发育过程中的重要调控因子之一。
2025年06期 v.53;No.466 57-63页 [查看摘要][在线阅读][下载 1595K] [下载次数：19 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 张海松;刘润来;苏惠贤;李欣雨;赵雨鑫;张巧灵;李建平;
为了揭示miR-200a是否通过靶向调控CDC45基因来影响辽宁绒山羊黑色素生成的生物学过程，选取黑、白色辽宁绒山羊采集背部皮肤组织，同时利用已保存的HEK293T细胞（人胚肾细胞）与B16细胞（黑色素瘤细胞）作为体外研究模型。首先通过运用miR数据库挖掘，预测到CDC45基因的3'UTR存在一个高度保守的miR-200a特异性结合位点；为验证二者之间的相互作用，在HEK293T细胞中构建了双荧光素酶报告基因系统进行验证；然后采用免疫荧光技术，对各组B16细胞内CDC45基因表达的特定分子（蛋白质、抗原等）进行精确定位与可视化表达分析；同时通过克隆形成试验，评估各组B16细胞的增殖潜能。最后借助qRT-PCR及Western blot等技术，全面评估CDC45基因在羊皮组织及B16细胞中的表达水平。结果表明，miR-200a的过表达在转录后（mRNA）及翻译后（蛋白质）水平均显著抑制了CDC45的活性，而针对该结合位点的突变处理则完全消除了这一抑制效应；在B16细胞模型中，miR-200a诱导的CDC45表达下调与黑色素细胞增殖能力的显著减弱呈现出紧密关联。从分子机制层面深入分析，结果发现，通过miR-200a-mimic转染来降低CDC45表达的效果，与miR-200a直接过表达所产生的影响高度一致，表明miR-200a与CDC45之间存在明确的功能性联系。综上，该研究结果证实了miR-200a能够特异性靶向调控CDC45基因。
2025年06期 v.53;No.466 64-71页 [查看摘要][在线阅读][下载 1716K] [下载次数：51 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 陈怡如;何进田;汤忠宗;王稳;王俊;张瑞强;牛玉;
为探究日粮中添加双氢青蒿素（DHA）对脂多糖（LPS）攻毒导致的断奶仔猪肠道损伤和免疫应激的缓解效果及潜在机制，选取18头21日龄断奶仔猪，随机分为对照组（CON）、LPS攻毒组（LPS）、LPS攻毒+DHA添加剂组（LPS+DHA），其中，CON组和LPS组饲喂基础日粮，LPS+DHA组饲喂添加DHA的日粮，28 d后，LPS组和LPS+DHA组仔猪腹腔注射100μg/kg LPS,CON组注射等量生理盐水；注射4 h后，将所有仔猪进行屠宰，采集血液和空肠样品进行分析。结果表明，LPS显著提高了血清中肠道损伤标志物，增加了血清和空肠中的促炎因子含量，降低了肠道免疫功能，提示免疫应激模型建立成功。与LPS组相比，LPS+DHA组仔猪体质量（BW）、平均日采食量（ADFI）和平均日增质量（ADG）均显著增加，而料质量比（F/G,kg/kg）显著降低；血清中二胺氧化酶（DAO）活性和D-乳酸（D-LA）含量显著降低；血清和空肠中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量也显著降低，而免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白G(IgG)浓度显著增加；此外，空肠中IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4、NF-κB的相对表达量显著降低，而IgG、FcRn的相对表达量显著增加。综上，日粮中添加双氢青蒿素能够提高断奶仔猪生长性能，有效缓解LPS攻毒引起的肠道屏障功能损伤及肠道免疫功能下降，其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路激活有关。
2025年06期 v.53;No.466 72-78页 [查看摘要][在线阅读][下载 1352K] [下载次数：27 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 李荣杰;齐博康;原现军;
青贮饲料霉菌毒素污染时有发生，而乳酸菌作为一类广泛存在于自然环境中的益生菌，不仅在青贮发酵过程中起主导作用，而且能产生多种抑菌物质（如有机酸、细菌素、蛋白类化合物等）以及通过吸附或生物降解等方式降低霉菌毒素含量。为了挖掘兼具抑菌和脱毒活性的功能乳酸菌，以产毒黄曲霉菌和禾谷镰孢菌为指示菌，以玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）和脱氧雪腐镰孢菌烯醇（Deoxynivalenol,DON）为底物，优选获得了4株兼具高效抑菌脱毒特性的功能乳酸菌，经鉴定分别为植物乳植杆菌LP10、LP64、LP71和发酵黏液乳杆菌LF92；并对乳酸菌在不同pH、温度、酶处理下的抑菌活性及对ZEN和DON的脱毒效果进行了检测。结果表明，随pH值升高，4株乳酸菌的发酵上清液对黄曲霉菌和禾谷镰孢菌抑菌活性均降低；经80、100℃处理后，各菌株上清液对黄曲霉菌的抑制效果降低，而LP71、LF92上清液经高温处理后对禾谷镰刀菌的抑制效果增强。蛋白酶处理结果表现出菌株特异性，仅LP71上清液经各蛋白酶处理后对禾谷镰刀菌的抑制效果与对照无差异。脱毒处理结果表明，LP64对ZEN和DON的脱毒率最高，分别为46.9%、82.9%，且脱毒机制主要为吸附作用，可作为青贮饲料生物防控的候选菌株。
2025年06期 v.53;No.466 79-86页 [查看摘要][在线阅读][下载 1506K] [下载次数：113 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 武佳乐;黄雅屏;
肉牛养殖生命周期中排放的多种温室气体，既会加剧全球气候变暖，也会因环保成本上升、资源浪费等直接影响产业的可持续发展。当前，我国畜牧业正处于转型的关键阶段，肉牛养殖行业低碳转型过程中面临的诸如产业体系庞大但技术水平较差，养殖全链条碳排放强度高，粪污、饲料浪费环境污染问题突出以及减排所需投入不足，缺乏保障与激励等问题，需要将“碳减排”目标深度融入肉牛养殖技术创新全过程。针对上述制约因素，笔者提出一方面要加强低碳养殖技术研发与落地，加大农业科技投入，支持饲料精准配比、粪污资源化利用等关键技术攻关，降低减排成本；另一方面，在制度层面要将低碳发展要求嵌入基础法律修订中，明确养殖主体碳减排责任，同步建立激励机制。
2025年06期 v.53;No.466 87-93页 [查看摘要][在线阅读][下载 1279K] [下载次数：20 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 陈卓;牛晓艳;刘春晓;吴苏君;闫益波;詹海杰;
为研究家兔卵巢响应孕马血清促性腺激素（PMSG）作用过程中组织学形态的变化及基因差异表达和功能富集的情况，将9只4～5月龄雌性日本大耳白兔随机平均分成3组（CK、T1和T2组），于试验第1天10:00给试验组注射PMSG 50 IU,CK组注射等量生理盐水，分别于注射后24 h屠宰CK和T1组，72 h屠宰T2组，解剖后摘取左右两侧卵巢，将左侧卵巢置于4%多聚甲醛溶液中固定用于切片制作和HE染色，右侧卵巢速冻后进行转录组测序。结果表明，PMSG处理后卵巢质量和卵巢指数均有增大的趋势，但各组间差异不显著；各组初级卵泡数和次级卵泡数差异不显著，成熟卵泡数T2组显著多于CK和T1组。转录组测序获得总reads数平均为45 530 086条，clean reads数平均为42 402 397条，Q20为97.68%,Q30为93.55%，测序质量符合后续分析的要求。差异表达基因分析结果显示，CK组相对于T1组共鉴定出536个差异表达基因，CK组相对于T2组共鉴定出668个差异表达基因，T1组相对于T2组共鉴定出407个差异表达基因，其中3组共有差异基因13个，涉及到与繁殖密切相关的CA11、FAT2、RUNX2等基因。KEGG通路分析富集到一系列与繁殖相关的通路，包括类固醇激素合成、MAPK信号通路、催产素信号通路、叶酸生物合成等过程。研究通过PMSG成功诱导家兔同期发情，并通过转录组测序在3组中鉴定到13个共同的差异表达基因，涉及一系列与繁殖相关的功能基因和通路。
2025年06期 v.53;No.466 94-107页 [查看摘要][在线阅读][下载 2240K] [下载次数：47 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 伍革民;韩雪;吴松成;
能量平衡与代谢调节影响畜禽食物摄入、蛋白质合成和脂肪沉积，进而影响体质量和屠宰性状。为研究能量代谢物含量差异与三穗鸭成年体质量的关联性，从480只三穗鸭母鸭中依据体型外貌及成年体质量表型选取44只三穗鸭母鸭，组成高、低体质量组，采用靶向代谢组技术对160日龄三穗鸭胸肌中的三羧酸循环、糖酵解途径、磷酸戊糖途径和氧化磷酸化等4种能量代谢途径中的32种能量代谢物含量进行鉴定，并利用R包软件对代谢物含量数据进行质量评价、主成分分析和组间差异代谢物筛选。结果表明，三穗鸭胸肌中，乳酸含量最高，其次依次为6磷酸葡萄糖、草酰乙酸和6磷酸果糖。采用正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）方法，筛选到显著差异代谢物还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）和苹果酸（MA）。组间比较分析结果表明，高体质量组中的NADPH含量显著高于低体质量组，MA含量极显著低于低体质量组。
2025年06期 v.53;No.466 108-114页 [查看摘要][在线阅读][下载 1289K] [下载次数：3 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ]
- 薛雅茜;蔡昀轩;黄纤涵;王晨曦;付雷明;董彦君;
产肠毒素性大肠埃希菌（ETEC）是引起断奶仔猪腹泻的主要病原菌，其多重耐药性的不断上升加剧了临床防控难度。对临床腹泻仔猪分离的1株大肠埃希菌进行耐药性及致病性分析，通过药敏试验及全基因组测序分析该临床分离菌株的耐药表型及携带耐药基因情况，通过全基因组测序鉴定菌株携带的毒力基因，采用PCR检测鉴定菌株携带的毒力因子，进一步对断奶仔猪攻毒，通过观察仔猪腹泻情况、精神状态、生长性能、攻毒菌排出、剖检病变及肠道病理学变化来评估该菌株的致病力。结果表明，该菌株血清型为O149∶H10，携带F4、STb、LT毒力因子，属于产肠毒素性大肠埃希菌，对多西环素、卡那霉素、氟苯尼考、环丙沙星等多种临床常用抗菌药物耐药，携带外排泵、四环素类、氨基糖苷类等耐药基因。致病性试验结果表明，攻毒后100%仔猪连续2 d发生腹泻，100%仔猪粪便中持续6 d被检测到攻毒菌的排出，剖检可见肠道充血肿胀；H&E染色可见肠绒毛破损、断裂、脱落。综上，该菌株具有多重耐药性和一定致病性，临床治疗中应优先选择头孢类等敏感药物，同时加强耐药性监测。
2025年06期 v.53;No.466 115-126页 [查看摘要][在线阅读][下载 2362K] [下载次数：34 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 杜梦华;李云洁;郭亚迪;梅航天;邵弓宇;尚雨欣;王江;褚贝贝;明胜利;
为探究短链脂肪酸异戊酸对痘苗病毒（VACV）体外增殖的抑制作用及其机制，采用直接免疫荧光法筛选5种短链脂肪酸的抗病毒效应；通过CCK-8法评估异戊酸（30～3 000μmol/L）对BHK-21、Vero细胞活力的影响；PI染色结合流式细胞术分析异戊酸（10～100μmol/L）对细胞周期的干预作用。利用流式细胞术定量异戊酸处理细胞中VACV-GFP的增殖水平；采用Western blotting检测VACV结构蛋白A27L、GFP表达变化；采用实时荧光定量PCR分析病毒关键基因F17R、E9L的mRNA转录水平。结果表明，异戊酸显著抑制VACV增殖，且在30～3 000μmol/L浓度下对细胞活力无显著影响，在10～100μmol/L浓度时未干扰细胞周期；Western blotting结果显示，异戊酸剂量依赖性抑制A27L、GFP蛋白表达；qPCR证实，其显著下调F17R、E9L的mRNA水平。综上，异戊酸通过抑制病毒蛋白合成及基因转录，有效阻断VACV体外增殖。
2025年06期 v.53;No.466 127-134页 [查看摘要][在线阅读][下载 1955K] [下载次数：5 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 林佳音;刘杰;唐斯琦;徐靖栲;刘家硕;王彤乐;孙子龙;
为了探究热应激与呕吐毒素（DON）联合作用对动物免疫系统的影响，以小鼠为研究对象，建立雄性49日龄ICR小鼠动物模型，适应环境7 d后，将48只小鼠随机分为对照组（不做处理，C组）、热应激组（每日42℃热应激2 h,H组）、DON组（每日灌服2 mg/kg DON,D组）及热应激加DON组（每日42℃热应激2 h+灌服2 mg/kg DON,HD组）；处理14 d后剖杀小鼠，通过苏木精—伊红（HE）染色对脾脏、胸腺进行形态学观察，并采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测免疫因子、细胞因子水平。HE染色结果显示，与C组相比，H组、D组、HD组脾脏被膜断裂、小梁结构破坏，红白髓界限模糊，胸腺皮质和髓质界限不清，血管结构模糊，细胞排列松散、边缘不清晰。ELISA检测结果显示，与C组相比，D组脾脏IgM含量与胸腺IgG、TNF-β、IL-4、IL-6含量均显著升高；H组未见显著变化。与H组相比，HD组脾脏IgM含量与胸腺IgG、IL-4含量均显著升高。综上，热应激和DON均能独立损害免疫器官结构与功能，但DON在胸腺炎症反应和屏障破坏中起主导作用，而热应激更倾向于抑制脾脏的适应性免疫。二者联合可能通过叠加氧化应激或炎症通路加重免疫抑制。
2025年06期 v.53;No.466 135-142页 [查看摘要][在线阅读][下载 1895K] [下载次数：64 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 蔡子慧;潘雯;朱聪;丁一;
犬中毒病例高发，及时诱吐是清除消化道毒物、阻止机体继续吸收的首选急救措施。目前，常用的催吐剂（如3%过氧化氢溶液）存在疗效不稳定、损伤消化道等问题，而疗效稳定的催吐剂盐酸阿扑吗啡（APO）需要静脉注射给药，难以满足畜主独立给药需求。为了探究APO是否可以从结膜囊、鼻黏膜、直肠给药并起到催吐的效果，以8只比格犬为对象，比较分析了APO静脉注射、皮下注射、结膜囊、鼻黏膜、直肠给药的催吐疗效与副作用，并采用改良高效液相色谱（HPLC）技术对可以提高APO稳定性的抗氧化剂进行了筛选。结果显示，APO结膜囊、鼻黏膜给药催吐成功率均可达100%，而不同浓度的APO直肠给药均无催吐效果。其中，鼻黏膜给药的最佳剂量为0.08 mg/kg，起效时间（3～4 min）与结膜囊给药相近，但短于皮下注射（7～8 min）和长于静脉注射（1～2 min），呕吐持续时间为1～2 min，副作用仅为出现轻度镇静，显著轻于静脉注射（心动过速）、结膜囊给药（结膜潮红）及皮下注射（注射疼痛）。在HPLC流动相为75%1 mmol/L的EDTA-2Na+0.1%三乙胺溶液和25%乙腈的条件下可以实现APO的良好分离；稳定性分析结果表明，0.2%焦亚硫酸钠能有效维持APO稳定性，且在4℃避光下存放30 d后药物也无明显降解，而0.2%L-抗坏血酸不能阻止APO的降解。综上，含0.2%焦亚硫酸钠的APO滴鼻剂具备给药便捷、催吐高效且安全性高等优势，可用于犬中毒及消化道异物急救。
2025年06期 v.53;No.466 143-151页 [查看摘要][在线阅读][下载 1863K] [下载次数：25 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 徐引弟;王治方;蔡旭旺;徐晓娟;张青娴;张立宪;焦文强;李海利;朱文豪;张家庆;雷亚楠;
为了调查河南省规模化猪场猪链球菌病的流行状况及危害，于2015—2024年从全省1 680个规模化猪场采集了2 860份病料，采用培养纯化、PCR鉴定、凝集法、琼脂扩散法药敏试验和小鼠动物试验对病料中的猪链球菌进行了分离和血清型鉴定，对获得的猪链球菌进行了耐药性和毒力分析以及耐药基因和毒力基因的鉴定。结果表明，共分离鉴定出2 932株致病性细菌，其中猪链球菌898株；猪链球菌的优势血清型是2型、9型、7型和3型，最主要的血清型是2型；血清群以D群为主。耐药性分析结果显示，猪链球菌对β-内酰胺类抗生素较为敏感，而对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、磺胺类药物均表现出较高的临床耐药性。检出率较高的耐药基因分别是aphA1、tet(B)、gyrA、parC基因。毒力分析结果显示，2型猪链球菌分离株对小鼠均有毒力，其中，毒力较高的sly~+mrp~+epf~+菌株最多。综上，河南省规模化猪场猪链球菌感染呈严重态势，且流行菌株存在高度耐药性，其优势血清2型更表现出强毒力与复杂的毒力基因型。
2025年06期 v.53;No.466 152-158页 [查看摘要][在线阅读][下载 1421K] [下载次数：73 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 瞿成龙;向雨欣;明胜利;曾磊;王江;褚贝贝;
为探究ODF1蛋白的生物学功能，制备并鉴定其特异性抗体工具，采用原核表达系统表达重组ODF1蛋白，将高纯度的重组ODF1蛋白作为免疫原，利用杂交瘤技术制备鼠源单克隆抗体，通过免疫新西兰兔制备多克隆抗体。采用Western blot和免疫荧光（IFA）对抗体性能进行系统评价。结果成功筛选出1A1-7、5C6-4等2株稳定分泌抗ODF1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，亚型均为IgM，同时获得了高效价的兔源多克隆抗体。Western blot和免疫荧光分析结果表明，单克隆、多克隆抗体均能特异性识别内源性、外源性ODF1蛋白，表现出良好的特异性和应用潜力。综上，该试验成功制备了特异性良好的ODF1单克隆、多克隆抗体。
2025年06期 v.53;No.466 159-165页 [查看摘要][在线阅读][下载 1682K] [下载次数：22 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 姜小雨;汪海东;郭金杰;陈桂珍;左守军;栗亮亮;宋鹏涛;刘虎;董海聚;刘芳;代宏宇;
为探究加味白头翁汤（SPD）治疗溃疡性结肠炎（UC）的潜在机制，采用网络药理学方法，从TCMSP、PubChem、Swiss Target Prediction和UniProt数据库筛选SPD的化学成分及作用靶点；利用Geencards、Disgenet及Ctd数据库获取UC相关靶点，通过比较分析确定SPD治疗UC的潜在作用靶点。进一步通过STRING、Cytoscape 3.8.2及DAVID进行靶点互作、网络构建和富集分析。结果显示，SPD含60种活性成分，匹配411个药物靶点；从3个数据库中分别筛选出5 027、1 460、18 098个UC相关靶点；经比较分析后，获得975个交集靶点可作为UC疾病靶点，进一步筛选确定SPD治疗UC的潜在靶点43个。STRING分析结果显示，Alb、IL-6、TNF、Caspase3、Egf、IL-10、Mmp9、Trp53、Ifng和MAPK14等为核心靶点；Cytoscape分析结果表明，槲皮素和木犀草素可能是SPD治疗UC的关键活性成分。GO富集分析结果显示，SPD通过调控基因表达等生物过程发挥作用；KEGG富集分析结果表明，SPD对UC的治疗作用涉及炎性肠炎、HIF-1信号通路、TNF信号通路及MAPK信号通路等。综上，SPD可能通过槲皮素、木犀草素作用于核心靶点，调控相关信号通路治疗UC。文章系统解析SPD治疗UC的成分—靶点—通路网络，明确了加味白头翁汤与原方的协同机制以及其核心成分、靶点及通路的特异性关联。
2025年06期 v.53;No.466 166-175页 [查看摘要][在线阅读][下载 2260K] [下载次数：223 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 刘石;刘缓缓;刘君君;穆向辉;郭子涵;徐鼎盛;项玉强;郭东辉;陈丽颖;
猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）是一种高度传染性的病原体，会导致猪（尤其是仔猪）严重腹泻，造成重大经济损失。为建立一种用于TGEV血清抗体的高特异性、高灵敏度的间接ELISA检测方法，为监测猪传染性胃肠炎病毒在猪场的流行情况以及免疫后抗体水平评价提供技术支撑，以灭活的TGEV HN—2012株全病毒作为固相包被抗原，系统性优化反应参数，确定最佳反应条件。结果表明，建立的间接ELISA检测方法阴阳性临界值为0.439 2，最佳反应条件为：用碳酸盐缓冲液将灭活后的抗原（灭活前病毒滴度1.0×10~7 TCID_(50)/mL）1∶8稀释，50μL/孔，37℃孵育3 h;2.5%BSA 37℃封闭2 h；血清样本稀释比例为1∶64,37℃孵育45 min；酶标抗体1∶6 000稀释，37℃孵育60 min;TMB显色10 min。该检测方法特异性好，与其他常见猪病毒阳性血清均无交叉反应；敏感性高，高免阳性血清1∶1 024倍稀释时检测结果仍为阳性；批内、批间重复性好，变异系数均小于10%；利用所建立的ELISA方法对100份疑似感染TGEV的猪血清样品进行检测，结果与血清中和试验符合率为98%。对河南省588份临床疑似感染猪传染性胃肠炎病毒的血清样品进行检测，抗体阳性率为64.97%。
2025年06期 v.53;No.466 176-182页 [查看摘要][在线阅读][下载 1445K] [下载次数：25 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 付朋飞;高定焯;张卓威;时逸洋;户安鑫;林家文;张语嫣;洪军;李志钢;
猪博卡病毒（Porcine bocavirus,PBoV）广泛存在于全球猪群中，其中，G3基因群（PBoV G3）会导致猪群发生腹泻，已成为威胁养猪业的重要病原。为了建立一种高效的PBoV G3检测方法，为深入揭示PBoV G3的流行特征及相关疾病防控提供可靠的技术支持，研究基于GenBank收录的PBoV G3 VP1基因保守区设计特异性引物，并以重组质粒pCE3 Blunt-VP1为标准模板，经条件优化构建了检测PBoV G3的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR(qPCR)检测方法。方法学评价结果表明，该体系可实现4.51拷贝/μL的最低检测限，灵敏度较常规PCR提高约100倍；对PBoV G1、PBoV G2及多种常见猪肠道病毒均无交叉扩增，特异性良好；批内和批间变异系数均小于2%，重复性稳定。临床样品检测结果显示，在212份腹泻猪粪便中，该方法的检出率为41.0%(87/212)，显著高于常规PCR的33.5%(71/212)，二者符合率达92.5%。综上所述，该方法兼具灵敏、特异和稳定的优势，适合大规模临床样品筛查。
2025年06期 v.53;No.466 183-190页 [查看摘要][在线阅读][下载 2013K] [下载次数：26 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ]